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外泌體表征與鑒定
根據(jù)國際外囊泡協(xié)會發(fā)布的指導首創(chuàng)《MISEV 2018》, 外泌體特征通過NTA測粒徑分布、TEM電鏡分析形態(tài)和Western Blot檢測標志蛋白三項鑒定方案來驗證
NTA分析樣品中外泌體的粒徑分布和顆粒濃度,TEM電子顯微鏡來觀察樣品中外泌體的形態(tài)特征,Western Blot檢測外泌體標志蛋白。


外泌體表征與鑒定
Western Blot蛋白免疫印跡分析
Western blot是通過抗原抗體特異性結合的原理,檢測外泌體標志蛋白,從蛋白質層面對外泌體進行鑒定。常用的外泌體標志蛋白包括CD63、CD81、CD9、Flot1、 TSG101及Alix等。
檢測方法:ECL化學發(fā)光,多功能化學發(fā)光凝膠成像分析系統(tǒng)。
樣本要求:血漿、細胞上清、唾液、尿液外泌體蛋白量> 10 μg,蛋白濃度>0.2 μg/μL;干冰運輸。

外泌體表征與鑒定
NTA 納米顆粒追蹤分析
NTA分析是從整體上對外泌體的顆粒濃度和粒徑分布情況進行檢測,具有準確、快速、重復性好等優(yōu)點。
檢測儀器:Particle Metrix(ZetaView)? ?
樣本要求:避免反復凍融,-80℃保存,干冰運輸。

外泌體表征與鑒定
TEM透射電子顯微鏡觀察法
TEM透射電子顯微鏡電鏡是從形態(tài)和大小上對外泌體形態(tài)結構和大小進行鑒定。
檢測儀器:透射電子顯微鏡(HITACHI,H-7650)
樣本要求:NTA顆粒濃度> 10?10?particles/mL,體積> 20 μL;避免反復凍融,-80℃保存,干冰運輸。